峰型問題是液相色譜儀的主要問題,在做液相分析過程中,我們就是要變換不同的條件來改變不好的峰型,對于樣品的異常峰,要區(qū)別對待,從主要問題出發(fā),一個一個加以解決。
1、色譜圖中未出峰 系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解;泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設(shè)置不正確;針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整。
2、一個峰或幾個峰是負(fù)峰 流動相吸收本底高;進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。
3、出的峰均為負(fù)峰 信號電纜接反或檢測器輸出及性設(shè)置顛倒;光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
4、出的峰均為寬峰 系統(tǒng)未達(dá)到平衡;溶解樣品的溶劑及性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效低了;溫度變化造成的影響。
5、所出峰比預(yù)想的小 樣品黏度過大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測器設(shè)置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。
6、出現(xiàn)倆峰或肩峰 進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高;保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞;保護(hù)拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰:進(jìn)樣量或樣品濃度高,溶解樣品的溶劑較流動相多;保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。
①柱溫低:升高柱溫;②樣品溶劑選擇不恰當(dāng):使用流動相作為樣品溶劑;③樣品過載:減少樣品含量;④色譜柱損壞:換柱子。
8、拖尾峰:柱過載,減少樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾,對樣品進(jìn)行清潔過濾;調(diào)整流動相;硅羥基作用,加入三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度減少流動相pH值;柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效,換燒結(jié)不銹鋼;加在線過濾器,對樣品進(jìn)行過濾;死體積或柱外體積過大,將連接點(diǎn)改低;盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管;柱效下降,換柱子;采用保護(hù)柱,對柱子進(jìn)行老化。
9、出現(xiàn)平頭峰 檢測器設(shè)置不正確;進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
10、出現(xiàn)多峰 進(jìn)樣閥殘余峰,可能為上次樣品的殘余。在每次進(jìn)完樣后用時間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物,改進(jìn)樣品的預(yù)處理;流動相污染,換流動相,盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用,隔夜的流動相再次使用時要過濾;盡可能使用HPLC試劑;流路中有小的氣泡,打開Purge閥,加快流速。
11、峰分叉 ①保護(hù)柱或分析柱污染:取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析,如果不行換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)拇胧?。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,換篩板或換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動相改變樣品溶劑,如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
12、峰變形 樣品過載,減少樣品載量。
13、早出的峰變形 樣品溶劑選擇不恰當(dāng) ①減少進(jìn)樣體積 ②運(yùn)用低及性樣品溶劑
14、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 柱外效應(yīng) ①調(diào)整系統(tǒng)連接(使用短、內(nèi)徑小的管路)
②使用小體積的流通池
15、酸性或堿性化合物的峰拖尾 緩沖不適合①使用濃度50~100 mM的緩沖液②使用等于流動相pH值的緩沖液
16、額外的峰 (1)樣品中有其他組分:正?,F(xiàn)象;(2)、進(jìn)樣的洗脫峰:①增加運(yùn)行時間或梯度斜率②增加流速;(3)空位或峰:①檢查流動相是否干凈 ②使用流動相作為樣品溶劑 ③減少進(jìn)樣體積。